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柚皮苷的高效液相色谱测定法

2013-10-02    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于含橘红、骨碎补、枳壳及其提取物为主要原料的保健食品中柚皮苷(naring-in)的测定。
本方法柚皮苷的检出限为1.9ng。

1.方法

提要样品中的柚皮苷用甲醇超声提取后,在高效液相色谱仪中用反相柱分离,283nm紫外吸收,用外标法定量。

2.仪器

(1)高效液相色谱仪、紫外检测器。
(2)超声波提取器。

3.试剂

(1)甲醇:分析纯、色谱纯。
(2)醋酸:分析纯。
(3)超纯水:双蒸水经Milli—Q型纯水器过滤。
(4)柚皮苷对照品:中国药品生物制品检定所。准确称取柚皮苷对照品5mg,置于25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,制成0.2mg/ml的标准溶液,再用甲醇稀释为0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.10mg/ml的标准使用液。

4.测定步骤

(1)样品制备:准确称取混合均匀的样品内容物适量(约1~2g,视含量而定),糖浆状样品可直接称取,液状样品可减压浓缩,置于lOOml容量瓶中,加甲醇60ml超声提取30rain,冷却后,加甲醇至刻度,摇匀,静置,取上清液用0.45μm滤膜过滤,于高效液相色谱仪中进样测定。
(2)标准曲线制备:上述各标准使用液分别注入高效液相色谱仪中,记录峰面积,以相应的对照品浓度值作图。
(3)色谱条件色谱柱:

Kromasil C18,5μm,250mm×4.6mm。

流动相:甲醇+水+醋酸(35+61+4,V/V/V)。

波长:283nm。

进样量:10ml。

流速:1.0ml/min。

5.结果计算

X=(c×V×100)/(m)

x——样品中柚皮苷含量[mg/lOOg(m1)];
c——从标准曲线查得样液中柚皮苷的质量(mg);
V——样液定容体积(ml);
M——样品质量(g或ml);

6.注释

(1)本方法线性范围为0.02~0.10mg/ml;r=0.9998。
(2)本方法平均回收率为99.7%,RSD为4.1%(n=3)。
(3)精密度:RSD为1.1%(n=6)。
(4)附:某橘红膏柚皮苷的标准及样品色谱图(图3—28、3—29)。

红膏柚皮苷标准品色谱图

柚皮苷标准品色谱图

红膏柚皮苷标样品色谱图

柚皮苷标样品色谱图

 

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