本方法适用于以苦荞麦为主要原料的保健食品中D一手性肌醇的测定。
本方法D一手性肌醇的检出限为50ng。
1.方法
提要对样品进行衍生化处理后,用气相色谱分离,FID检测器检测,以相对保留时间定性,以峰面积外标法定量。
2.仪器
(1)气相色谱仪,配有FID检测器。
(2)水浴锅。
3.试剂
除非另有说明,所有试剂均为分析纯。
(1)无水吡啶。
(2)乙酸酐。
(3)盐酸羟胺。
(4)二氯甲烷。
(5)D一手性肌醇标准品:纯度95.0%,购自Acros Organics公司。
4.分析步骤
(1)样品处理:称取适量的粉碎样品(相当于D一手性肌醇1.5mg,精密至0.001g),置于10ml试管中,加入10mg盐酸羟胺、0.5ml无水吡啶,于90℃水浴中保持30min。取出冷却后加入0.5ml乙酸酐,于90℃水浴中保持30min,待样品冷却后用氮气吹干。然后用二氯甲烷转移至10ml容量瓶中(反复多次用二氯甲烷洗涤),用二氯甲烷定容至刻度,待进行气相色谱分析。
(2)标准工作溶液的制备:称取10mg左右D一手性肌醇标准品,置于10ml试管中,依照样品处理的方法进行操作,得到10ml标准溶液(浓度为1mg/ml)。取标准溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml,分别置于10ml容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度,得浓度分别为0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.25mg/ml的系列标准溶液,待进行气相色谱分析。
(3)色谱条件
色谱柱:OV 1701 石英毛细管柱,0.53mm X 30m。
检测器:氢火焰离子化检测器。
温度:气化室温度260℃;检测器温度250℃;柱温程序升温,起始温度120℃,保持3min,然后以10℃/min的速度升至195℃,再以3℃/min的速度升至240%,保持10min结束。
气流速度:载气压力(N2)0.60kg/cm2;燃气压力(H2)0.65kg/cm2;助燃气(空气)压力0.50kg/cm2。
分流比:30:1。
(4)分别将1μl不同质量浓度的手性肌醇标准溶液及样品溶液注入气相色谱仪中,以保留时间定性,以手性肌醇质量浓度与相对应的峰面积绘制工作曲线,获得线性回归方程及相关系数,以此计算样品进样溶液中手性肌醇的浓度。
(5)色谱图:标准溶液色谱图见图3—66,样品溶液的色谱图见图3—67。D一手性肌醇的保留时间约为18.0min。
5.结果计算
样品中D一手性肌醇的含量按下式进行计算:
X=c/m×10
式中x——样品中D一手性肌醇的含量(mg/g);
c——进样液中D一手性肌醇的浓度(mg/m1);
m——样品的质量(g)。
10——样品处理后溶液定容体积(m1)。
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