β一胡萝卜素的分光光度测定法

本方法只适用于保健食品营养补充剂中β一胡萝卜素(β—carotene)的测定。

本方法β一胡萝卜素的检出限为0．2μg。

1．方法提要

目前，胡萝卜素的测定方法主要为GB／T5009．83—2003“食品中胡萝卜素的测定”方法(含高效液相色谱法和纸层析法)，这两种方法都是针对食品中与蛋白质结合的胡萝卜素而言，要用混合溶剂提取(甚至皂化)、柱层析纯化、分离测定等繁琐的操作规程步骤；对于只强化天然G一胡萝卜素的营养补充剂中岱一胡萝卜素的检测，可根据产品中β一胡萝卜素与标准对照品的正己烷溶液在分光光度计450nm处测吸光度值，比色定量。

2．仪器

(1)可见分光光度计。

(2)高速离心机：10000r／min。

(3)旋涡混合器。

3．试剂

氯仿(AR)、正己烷(AR)、p一胡萝卜素标准品[Fluka公司，纯度>97．0％(UV)]。

4．测定步骤

(1)样品测定：准确称取适量的均匀样品(准确至0．001g)，用氯仿溶解并定容至25～50ml，取0．10ml(或适量)加入到5．0ml的正己烷溶液中，混匀，在分光光度计450nm处测吸光度值(应在0．3～0．4之间)。这类保健食品多为用植物油稀释的软胶囊，如为片剂和粉剂，用氯仿溶解后，静置片刻，取上清液，10000r／min离心3min，再取样测定。

(2)标准溶液的标定及配制

1)称取5．0mg β一胡萝卜素标准品溶解在25ml氯仿中。

2)吸取0．050ml上述标准溶液加入到5．0ml的正己烷溶液中，在分光光度计450nm处，以正己烷作空白调零测定其吸光度值，连续测定三次，取其平均值，按下式计算标准溶液的浓度：

X=（A×5.05）/（E×0.05）

式中X——β一胡萝卜素标准溶液的浓度(μg／ml)；

A——吸光度值；

E——β一胡萝卜素在正己烷溶液中，入射波长450nm，比色皿厚度1cm，溶液浓度为1mg／L的吸光系数为0．2638；

用正己烷作溶剂，再将上液配成0μg／ml、0．5μg／ml、1．0μg／ml、1．5μg／ml、2．0μg／ml、2．5μg／ml的标准系列溶液，在450nm处测定并记录相应的吸光度值，以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为Y=0．2598x+0．0077，r=0．9999。

β一胡萝卜素标准曲线

5. 结果计算

X=(C×V×F×100)/(m×1000)

式中X——样品B一胡萝卜素(mg／100g)；

C——样品比色溶液相当于标准(μg／ml)；

V——样品溶液定容体积(ml)；

F——样品溶液比色时的稀释倍数(5．1／0．1)；

m——样品质量(g)；

1000——μg换算成mg的换算系数。

6．注释

(1)本法参考依据为QB1414—91中华人民共和国轻工行业标准“食品添加剂天然p一胡萝卜素”；本法只适用于添加单一种类胡萝卜素的营养补充剂，对该类型产品应同时进行其辅料的阴性确证试验。

(2)因B一胡萝卜素易氧化和不稳定，标准品标定后应在冰箱保存并在24小时内使用，否则应在实验前标定其即时浓度。

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