本方法只适用于保健食品营养补充剂中β一胡萝卜素(β—carotene)的测定。
本方法β一胡萝卜素的检出限为0.2μg。
1.方法提要
目前,胡萝卜素的测定方法主要为GB/T5009.83—2003“食品中胡萝卜素的测定”方法(含高效液相色谱法和纸层析法),这两种方法都是针对食品中与蛋白质结合的胡萝卜素而言,要用混合溶剂提取(甚至皂化)、柱层析纯化、分离测定等繁琐的操作规程步骤;对于只强化天然G一胡萝卜素的营养补充剂中岱一胡萝卜素的检测,可根据产品中β一胡萝卜素与标准对照品的正己烷溶液在分光光度计450nm处测吸光度值,比色定量。
2.仪器
(1)可见分光光度计。
(2)高速离心机:10000r/min。
(3)旋涡混合器。
3.试剂
氯仿(AR)、正己烷(AR)、p一胡萝卜素标准品[Fluka公司,纯度>97.0%(UV)]。
4.测定步骤
(1)样品测定:准确称取适量的均匀样品(准确至0.001g),用氯仿溶解并定容至25~50ml,取0.10ml(或适量)加入到5.0ml的正己烷溶液中,混匀,在分光光度计450nm处测吸光度值(应在0.3~0.4之间)。这类保健食品多为用植物油稀释的软胶囊,如为片剂和粉剂,用氯仿溶解后,静置片刻,取上清液,10000r/min离心3min,再取样测定。
(2)标准溶液的标定及配制
1)称取5.0mg β一胡萝卜素标准品溶解在25ml氯仿中。
2)吸取0.050ml上述标准溶液加入到5.0ml的正己烷溶液中,在分光光度计450nm处,以正己烷作空白调零测定其吸光度值,连续测定三次,取其平均值,按下式计算标准溶液的浓度:
X=(A×5.05)/(E×0.05)
式中X——β一胡萝卜素标准溶液的浓度(μg/ml);
A——吸光度值;
E——β一胡萝卜素在正己烷溶液中,入射波长450nm,比色皿厚度1cm,溶液浓度为1mg/L的吸光系数为0.2638;
用正己烷作溶剂,再将上液配成0μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml的标准系列溶液,在450nm处测定并记录相应的吸光度值,以浓度值为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。其回归方程为Y=0.2598x+0.0077,r=0.9999。
5. 结果计算
X=(C×V×F×100)/(m×1000)
式中X——样品B一胡萝卜素(mg/100g);
C——样品比色溶液相当于标准(μg/ml);
V——样品溶液定容体积(ml);
F——样品溶液比色时的稀释倍数(5.1/0.1);
m——样品质量(g);
1000——μg换算成mg的换算系数。
6.注释
(1)本法参考依据为QB1414—91中华人民共和国轻工行业标准“食品添加剂天然p一胡萝卜素”;本法只适用于添加单一种类胡萝卜素的营养补充剂,对该类型产品应同时进行其辅料的阴性确证试验。
(2)因B一胡萝卜素易氧化和不稳定,标准品标定后应在冰箱保存并在24小时内使用,否则应在实验前标定其即时浓度。
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