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丹参素钠的高效液相色谱测定法

2013-10-17    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于保健食品中丹参素的测定。

本方法丹参素的检测限为0.05ng。

本方法线性范围为25~100μg/ml。

1.方法

提要试样中的丹参素经提取后,在高效反相色谱C1,柱分离,用紫外检测器检测,以外标法测定其含量。

2.仪器高效液相色谱仪,带紫外检测器或二极管阵列检测器。

3.试剂除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

(1)甲醇:色谱纯。

(2)乙腈:色谱纯。

(3)1%乙酸(V/V)溶液:取10ml乙酸加水至1000ml,溶解混匀,过0.45μm微孔滤膜,待用。

(4)流动相:甲醇+1%乙酸(V/V)溶液(10+90,V/V)。

(5)丹参素钠对照品:中国生物制品检定所。

(6)丹参素钠标准溶液:精密称取丹参素钠对照品0.0100g,移入100ml棕色容量瓶中,加入甲醇,以超声波振荡助溶,定容,成浓度为100μg/ml的标准工作液。再逐级稀释成浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的标准溶液。

4.测定步骤

(1)样品处理:称取均匀样品1.0g(精确到0.1mg),置于50ml棕色容量瓶中,加入40ml甲醇,以超声波振荡30min,取出,冷却后用甲醇定容至刻度,摇匀,经0.45μm微孔滤膜过滤,清液待分析。

(2)标准工作曲线绘制:分别取10μl丹参素钠标准工作系列溶液(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)进样分析,以测得的丹参素钠的峰面积分别对丹参素钠的浓度绘制标准曲线。

(3)色谱条件

色谱柱:ODS液相色谱柱,4.6mm×150mm,5μm。

流动相:甲醇+1%乙酸(V/V)溶液(10+90,V/V)。

流速:1.0ml/min。

柱温:室温。

检测波长:280nm。

(4)样品测定:取样品滤液10μl进液相色谱仪分离测定,根据色谱峰保留时间定性,以外标峰面积法进行定量。

(5)色谱图:丹参素钠标准色谱图见图3—89,

丹参素钠标准色谱图

丹参素钠标准色谱图

5.结果计算

根据待测样品色谱峰面积,由标准曲线回归方程式得样品液中丹参素钠含量,计算出样品中丹参素钠的含量。样品中丹参素钠含量按下式进行计算:

X=(c×V×100×197)/(m×220×1000×1000)

式中X——样品中丹参素含量(g/100g);

c——进样液中丹参素钠的浓度(μg/ml);

V——样品的定容体积(ml);

m——样品的取样量(g);

197——丹参素的分子量;

220——丹参素钠的分子量。

 

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