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核黄素、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇高效液相色谱法

2013-11-01    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于保健食品营养补充剂中的核黄素(riboflavin)、烟酸(nicotinic acid)、烟酰胺(nicotinamide)、盐酸吡哆醇(pyridoxine)的测定。

本方法的最低检出量:核黄素2.2ng,烟酸8.2ng,烟酰胺6.2ng,盐酸吡哆醇3.0ng。

1.方法提要

将粉碎均匀的片剂、胶囊或液体样品用提取液超声波提取和稀释,在高效液相色谱仪用C18柱分离,以紫外检测,用外标法定量。

2.仪器

高效液相色谱仪、紫外检测器、超声波提取器、离心机。

3.试剂

(1)甲醇:分析纯、色谱纯。

(2)乙腈:色谱纯。

(3)磷酸:分析纯。

(4)1一癸烷磺酸钠(sodium1-decanesulfonate)离子对试剂。

(5)提取和稀释液:甲醇+水+磷酸(100+400+0.5)。

(6)核黄素标准储备液:将标准品核黄素(纯度>99%)粉状结晶置于五氧化二磷干燥器中,24小时后,准确称取25mg,置于1L棕色容量瓶中,加入1.2ml冰乙酸和750ml水,将容量瓶置于温水中摇动,待其溶解,冷至室温,用水稀释至刻度,于冰箱中保存。

(7)烟酸标准储备液:准确称取干燥的标准品烟酸(纯度>99%)50.0mg,用水以超声波助溶并定容至50ml。

(8)烟酰胺标准储备液:准确称取干燥的标准品烟酰胺(纯度>99%)50.0mg,用水以超声波助溶并定容至50ml。

(9)盐酸吡哆醇标准储备液:准确称取干燥的标准品盐酸吡哆醇(纯度>99%)50.0mg,用水以超声波助溶并定容至50ml。

(10)混合标准使用液:临用前根据样液被测成分浓度需要,用甲醇+水+磷酸(100+400+0.5)稀释成混合标准使用液。

4.测定步骤

(1)样品处理:取20粒以上的片剂或胶囊试样研磨混匀,称取一定量(准确至0.001g),置于100ml棕色容量瓶中,用提取液约60ml超声波提取5min后,再加提取液至刻度,并稀释成合适的进样浓度,经0.45μm滤膜过滤后为样液(液体试样可直接用提取液稀释)。

(2)标准及样品测定:分别取混合标准使用液和样品液,在高效液相色谱仪中进样测定,并记录相应的峰面积,以外标法定量。

(3)色谱条件

色谱柱:Kromasil C18,250mm×4.6mm,5μm。

流动相:1一癸烷磺酸钠(1.229溶于850ml水)+乙腈+磷酸(850+150+1)。

检测波长:280nm。

流速:1.0ml/min。

进样量:10μl。

5.结果计算

X=(A1×C×V×F)/(A2×m×1000)

式中X——样品中单一成分的含量[mg/100g(mL)];

A1——样品中单一成分峰面积;

c——标准溶液浓度(μg/ml);

V——样品定容体积(ml);

F——样液稀释倍数;

A2——标准溶液中单一成分峰面积;

m——样品质量(g或ml);

1000——μg换算成mg的换算系数。

6.注释

(1)本方法出峰顺序为核黄素、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇,由于核黄素出峰居前,要注意样液中色素(如甜菜红)的干扰,最好能同时做阴性样品空白对照。

(2)标准溶液应现配,实验操作过程应避光。

(3)本方法线性范围:核黄素0.5~50.0μg/ml,烟酸1.0~100μg/ml,烟酰胺1.0~100μg/ml,盐酸吡哆醇0.5~50.0μg/ml。

(4)本方法平均回收率:核黄素99.6%,烟酸102.3%,烟酰胺100.3%,盐酸吡哆醇101.0%。

(5)精密度RSD:核黄素0.46%,烟酸3.2%,烟酰胺1.2%,盐酸吡哆醇0.62%。

维生素B2、烟酸、烟酰胺、维生素B6标准色谱图

维生素B2、烟酸、烟酰胺、维生素B6标准色谱图

(6)附:维生素B2、烟酸、烟酰胺、维生素B6标准色谱图(图3—134)

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