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总皂苷的分光光度测定法

2013-11-11    分类:检测方法    0人评论

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本方法适用于保健食品中总皂苷的测定。

本方法人参皂苷Re的最低检出浓度为2μg/ml。

1.方法提要

样品中总皂苷经提取、PT一大孔吸附树脂柱预分离后,在酸性条件下,香草醛与人参皂苷生成有色化合物,以人参皂苷Re为对照品,于560nm处比色测定。

2.仪器

(1)722分光光度计。

(2)PT一大孔吸附树脂柱。

(3)超声波振荡器。

3.试剂

(1)甲醇:分析纯。(2)乙醇:分析纯。(3)人参皂苷Re标准品:中国药品生物制品检定所。(4)5%香草醛溶液:称取59香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100ml。(5)高氯酸:分析纯。(6)冰乙酸:分析纯。(7)人参皂苷Re标准溶液:精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg,用甲醇溶解并定容至10ml,即每1ml含人参皂苷Re2.0mg。(8)重蒸水。

4.测定步骤

(1) 样品处理

1) 固体样品:称取1.0g左右样品置于100ml烧杯中,加入20~40ml 85%乙醇,超声波振荡30min,再定容至50ml,摇匀,放置,吸取上清液1.0ml,挥干后以水溶解残渣,进行柱分离。

2) 液体样品:含乙醇的酒类样品:准确吸取1.0ml样品放于蒸发皿中,蒸干,用水溶解残渣,用此液进行柱层析。非乙醇类液体样品:准确吸取1.0ml样品(如浓度高或颜色深,需稀释一定体积后再取1.0ml,直接进行柱分离。

(2)柱层析:以PT一大孔吸附树脂柱进行层析分离,准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0ml上柱,用15ml水洗柱,以洗去糖分等水溶性杂质,弃去洗脱液,再用20ml 85%乙醇洗脱总皂苷,收集洗脱液于蒸发皿中,于水浴上蒸干,以此作显色用。

(3)显色:在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣溶解,再加0.8ml高氯酸,混匀后移人10ml比色管中,塞紧盖子,于60℃以下水浴上加温15min取出,冷却后准确加入冰乙酸5.0ml,摇匀后以1.0cm比色皿于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。

(4)标准曲线的绘制:吸取人参皂苷Re标准溶液(2.0mg/ml)0μl、20μl、40μl、60μl、80μl、100μl(相当于人参皂苷Re0μg、40μg、80μg、120μg、160μg、200μg),分别置于10ml比色管中,用氮气吹干,按上述显色步骤测定吸光度,并绘制标准曲线。人参总皂苷浓度在40~200μg/ml之间与吸光度值呈线性关系,相关系数(r)0.999。

5.结果计算

X=(m1×V1×1000)/(m×V2×1000×1000)

式中X——样品中总皂苷(以人参皂苷Re计)(g/kg或g/L);

m——试样质量或试液体积(g或ml);

V1——样品提取液总体积(ml);

V2——样品提取液测定用体积(ml);

m1——从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量(μg)。

6.注释

(1)人参系五加科植物人参Panax ginseng C A Meycr的根,含有多种人参皂苷(ginsenoside),多数为达玛烷型皂苷,如人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rd等,少数为齐墩果酸型(c型)皂苷,如人参皂苷Re,由于苷元不同,达玛烷型皂苷又分为20S一原人参二醇类皂苷(A型)和20S一原人参三醇类皂苷(B型)。A型和B型皂苷酸水解后,分别得到人参_二醇(pan-axadial)和人参三醇(panaxatriol)。除人参外,五加科的西洋参、三七、刺人参、刺五加和葫芦科的绞股蓝中亦含有与人参皂苷类似的化合物。当保健食品原料配方中含有上述多种原料时,即以本法“总皂苷(以人参皂苷Re计)”报告检测结果。

(2)对于人参、西洋参、绞股蓝纯品或以其为主要原料加工的保健食品,按《中华人民共和国药典》,以薄层色谱法进行鉴定试验,将受试品色谱与对照药材色谱及对照品色谱进行比较确定其主要原料后,人参、西洋参制品仍以人参皂苷Re为对照品进行检测,而绞股蓝制品以绞股蓝总皂苷(中国药品生物制品检定所)为对照品进行检测,分别以“人参总皂苷”、“西洋参总皂苷”、“绞股蓝总皂苷”报告检测结果。

(3)回收率:90%~105%。

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