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红景天苷的高效液相色谱测定法(一)

2013-10-19    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于以红景天苷为主要原料的保健食品中红景天苷的测定。
本方法红景天苷的检出限为0.010μg。

1.方法

提要保健食品中的红景天昔用一定浓度的甲醇提取后,经高效液相色谱仪分离,与标准品的保留时间比较定性,用峰面积外标法定量。

2.仪器

(1)高效液相色谱仪,配有紫外检测器。
(2)恒温水浴锅。

3.试剂

所用试剂除特殊注明外均为分析纯,实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏水。
(1)60%甲醇溶液:取60ml甲醇加入到40ml水中,混匀。
(2)甲醇:优级纯。
(3)石油醚:沸程30℃~60℃。
(4)标准储备液:准确称取红景天苷标准品20.0mg,用甲醇溶解并定容至10.0ml,混匀后放冰箱保存。此溶液每1ml含红景天苷2.0mg。
(5)标准使用液:准确吸取标准储备液1.00ml,置于10ml容量瓶中,用甲醇稀释定容至刻度,混匀。此溶液每1ml含红景天苷0.20mg。

4.测定步骤

(1)样品处理

1)固体样品:准确称取研磨混匀的固体试样2.0g,用少量石油醚(30℃~60℃)脱脂2次。弃去石油醚,待试样中残留的石油醚挥干后,将试样置于50ml具塞比色管中,加入60%甲醇溶液40ml左右,置60℃水浴保温2h,取出,冷却至室温后,用60%甲醇溶液定容为50ml,混匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供测定用。
2)液体样品:准确吸取20.0ml试样,置于50ml具塞比色管中,加入甲醇30ml,置60。C水浴保温40min,冷却后用甲醇定容为50ml,混匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供测定用。

(2)色谱条件

色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm,5μm。
流动相:甲醇+0.02mol/L乙酸钠溶液(9+91)。
流速:1.0ml/min。
检测波长:222nm。
检测灵敏度:0.02AUFS。
进样量10μl。

(3)标准曲线的绘制:精密吸取标准储备液0ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50ml、3.00ml,分别置于10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,混匀后,分别取10μl注入高效液相色谱仪中,以峰面积对浓度绘制标准曲线。标准曲线方程:Y=2.356×10^(-6)+0.014,r=0.9991。

(4)样品测定:取供色谱测定的样品处理液数毫升,用0.45μm水相过滤膜过滤,取滤液10μ1注入高效液相色谱仪中测定,与标准品的保留时间比较定性,与峰面积比较定量。红景天苷标准品色谱图见图3—106,样品色谱图见图3—107。

红景天苷色谱图

红景天苷色谱图

5.结果计算

X=V×c/m

式中X——样品中红景天苷含量[mg/g(ml)];
V——样品处理液总体积(ml);
c——测试液中红景天苷的浓度(mg/ml);
m——样品质量(g或ml)。

6.精密度和准确度

在不同样品中加入不同浓度的红景天苷标准液进行回收实验,回收率为96.0%~99·2%。同一样品进行10次测定结果的相对标准偏差为4.5%。

7.注释

(1)红景天苷(salidroside或rhodioloside)是一种含氧苷。红景天苷分子中羟基多,极性大,能溶于水、醇等极性溶剂,不溶于非极性有机溶剂,可用水或醇提取。水溶液干扰物太多,多采用醇提取。

(2)组分复杂的样品,进行液相色谱分析时,干扰因素多,可用硅结构式胶柱层析进行净化,除去大部分杂质。具体操作:将样品的甲醇溶液挥干后,用少量水溶解样品,水溶液进硅胶柱(硅胶柱预先用甲醇活化),用少量水洗涤硅胶柱2~3次后,用甲醇或甲醇与不同比例的三氯甲烷的混合液洗脱,收集洗脱液,挥干溶剂,残渣用甲醇溶解后进行分析测定。

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