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白藜芦醇的高效液相色谱测定法(二)

2013-10-18    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于保健食品中自藜芦醇的测定。
本方法白藜芦醇的检出限为100ng。

1.方法

提要样品中的白藜芦醇用甲醇超声提取,用液相色谱C18柱分离,以保留时间定性,以峰面积外标法定量。

2.仪器

(1)高效液相色谱仪。
(2)紫外检测器。

3.试剂

除非另有说明,所有试剂均为分析纯。
(1)水:GB/T6682规定的一级水。
(2)乙腈:色谱纯。
(3)冰醋酸。
(4)白藜芦醇标准品:纯度≥99%,中国药品生物制品检定所。
(5)白藜芦醇标准溶液:精密称取白藜芦醇标准品10mg,置于50ml容量瓶中,用乙腈溶解并稀释到刻度,得浓度为200μg/ml标准储备液。分别精密吸取标准储备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml置于10ml容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,得浓度分别为10.0μg/ml、20.0μg/ml、50.0μg/ml、100μg/ml的标准系列溶液。

4.分析步骤

(1)样品处理:称取适量样品(相当于白藜芦醇1.25mg,精密至0.001g),置25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,清液待分析。
(2)色谱条件
色谱柱:C18柱,150mm×4.6mm,5μm。
流动相:乙腈+冰醋酸+水(25+2+73)。
流速:1.0ml/min。
波长:303nm。
进样量:10μl。
柱温:室温。
(3)色谱测定:分别将10μl不同质量浓度的白藜芦醇标准溶液及制备后的样品溶液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,以白藜芦醇质量浓度与相对应的峰面积绘制工作曲线,获得线性回归方程及相关系数,以此计算样品进样溶液中自藜芦醇的浓度。
(4)色谱图:标准溶液及样品溶液的色谱图见图3—105。白藜芦醇的保留时间约为9.8min。

标准溶液及样品溶液的色谱图

标准溶液及样品溶液的色谱图

5.结果计算

样品中白藜芦醇的含量按下式进行计算:

X=(c×V)/(m×1000)

x——样品中白藜芦醇含量(g/kg);
c——样品进样溶液中白藜芦醇的质量浓度(μg/ml);
V——定容体积(25ml);
m——样品的质量(g)。
1000——由μg/g换算为g/kg的换算系数。

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