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植物甾醇的高效液相色谱测定法

2013-10-08    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于保健食品中植物甾醇的测定。

本方法谷甾醇和豆甾醇的检出限为0.02μg。

本方法线性范围为0.1~0.5mg/ml。

1.方法提要

试样中的谷甾醇和豆甾醇经提取后在高效反相色谱C18柱分离,用紫外检测器检测,以外标法定量谷甾醇和豆甾醇的含量。

2.仪器

高效液相色谱仪,带紫外检测器。

3.试剂

除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
(1)异丙醇:色谱纯。
(2)乙腈:色谱纯。
(3)乙醇。
(4)β一谷甾醇对照品:Fluka公司(纯度≥90%)。
(5)豆甾醇对照品:Fluka公司(纯度≥90%)。
(6)谷甾醇和豆甾醇混合标准溶液:精密称取13一谷甾醇和豆甾醇对照品0.0100g,移人10ml容量瓶中,加入乙醇,超声波振荡助溶,并用乙醇定容到10ml,此为浓度1.0mg/ml的标准储备液。

4.测定步骤

(1) 样品处理:称取均匀样品0.259(精确到0.1mg),置于50ml容量瓶中,加入40ml乙醇,超声波振荡60min取出,冷却后用乙醇定容至刻度,摇匀后经0.45斗m微孔滤膜过滤,清液待分析。

(2) 标准工作曲线绘制:精密吸取β一谷甾醇和豆甾醇标准溶液(1.0mg/m1)1.0、2.0.5.0ml,分别置于10ml容量瓶中,用乙醇定容,摇匀。分别取10斗l标准工作系列溶液进样分析,以测得的B一谷甾醇和豆甾醇的峰面积,分别对β一谷甾醇和豆甾醇的浓度绘制标准曲线。

(3) 色谱条件

色谱柱:ODS C18液相色谱柱,4.6mm×250mm,5μm。
流动相:乙腈+异丙醇(70+30,V/V)。
流速:1ml/min。
柱温:室温。
紫外检测波长:210nm。

(4) 样品测定:取样品滤液10斗l进液相色谱仪分离测定,根据色谱峰保留时间定性,以外标峰面积法进行定量。

(5) 色谱图:豆甾醇和β一谷甾醇标准色谱图见图3—57,样品色谱图见3—58。

豆甾醇和β-豆甾醇色谱图

豆甾醇和β-豆甾醇色谱图

5.结果计算

根据待测样品色谱峰面积,由标准曲线回归方程式得样液中β一谷甾醇和豆甾醇含量,计算出样品中的含量。
样品中B一谷甾醇和豆甾醇含量按下式进行计算:

X=(c×V×100)/(m×100)

式中x——样品中β一谷甾醇和豆甾醇含量(g/lOOg);
c——进样液中β一谷甾醇和豆甾醇的浓度(mg/ml);
V——样品的定容体积(ml);
m——样品的取样量(g)。

6.注释

植物甾醇是一类以环戊烷全氢菲为骨架(又称甾核)的物质,在自然界中主要存在于植物种子之中。植物甾醇主要成分为B一谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇等。β一谷甾醇(beta—Sitos-tero1)化学名称为5一豆甾烯一(3β)一醇,分子式为C29H50O,分子量为415,它是一种白色结晶或结晶性粉末,溶于氯仿、热乙醇、乙醚,几乎不溶于水。豆甾醇(stigmastero1)化学名称为5,22一豆甾二烯一(3β)一醇,分子式为C29H48O,分子量为413,它是一种无色结晶或结晶性粉末,溶于热乙醇、乙醚、丙酮、苯、氯仿等有机溶剂,不溶于水。β一谷甾醇、豆甾醇的结构式如图3—59、3—60。

β-豆甾醇和豆甾醇结构式

β-豆甾醇和豆甾醇结构式

 

参考文献

许文林,沙鸥,钱俊红,等.混合植物甾醇中豆甾醇和β一谷甾醇的高效液相色谱分析.分析测试学报2003;22(6):98—101

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