洛伐他汀的高效液相色谱测定法

本方法适用于以洛伐他汀(lovastatin)为功效成分或以红曲为原料的保健食品中洛伐他汀的测定。
本方法洛伐他汀的检出限为0．4μm。

1．方法

提要样品中洛伐他汀用适当浓度乙醇提取后，以中性氧化铝柱净化，甲醇洗脱，用液相色谱仪分离测定，与标准品保留时间比较定性，以峰面积外标法定量。

2．仪器

(1)高效液相色谱仪，配有紫外检测器，ODS色谱柱。
(2)超声波提取器。
(3)微量进样器。

3．试剂

本方法所用试剂除特殊注明外均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
(1)乙醇溶液(75％)：25ml水中加入无水乙醇75ml，混匀。
(2)甲醇。
(3)中性氧化铝柱预处理：临用前用10ml甲醇活化。
(4)标准储备液：准确称取洛伐他汀标准品10．0mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液每1ml含洛伐他汀200μg。
(5)标准使用液：准确吸取标准储备液5．0ml，置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。此溶液每1ml含洛伐他汀40．0μg。

4．测定步骤

(1) 样品处理：准确称取混合均匀的样品2．0g，置于50ml容量瓶中，加75％乙醇溶液30ml，混匀，以超声波提取，补加75％乙醇溶液至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液后，准确吸取滤液5．0ml，通过预先用甲醇活化过的中性氧化铝柱，用甲醇20ml洗脱，收集甲醇洗脱液备用。
(2) 色谱条件

色谱柱：ODS一120A，4．6mm×250mm。

流动相：甲醇+水(75+25)。

检测波长：237nm。

流速：1．0ml／min。

进样量：10μl。

(3)标准曲线的绘制：准确吸取标准储备液适量，用甲醇分别配制成每lml含洛伐他汀40、80、160、240、320、400μg的标准溶液，用微量进样器取10μl注入高效色谱仪测定，并绘制标准曲线。

(4)样品测定：用微量进样器取样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中测定，以保留时间定性，以峰面积外标法定量。洛伐他汀标准品色谱图见图3—75，样品色谱图见图3—76。

图3—75标准品色谱图

图3—76样品色谱图

5．结果计算

X=m1÷m×2000m
式中X——样品中洛伐他汀的含量(μg／kg)；
m1——进样体积中洛伐他汀的质量(μg)；
m——样品质量(g)；
2000——样品体积换算系数。

6．准确度和精密度

本方法不同浓度的加标回收率均在80％～110％。10次测定结果的相对标准偏差均在5．0％～15．0％。

7．注释

(1)洛伐他汀是以大米为原料，接种红曲霉，经培养后的代谢产物，具有降血脂功能。其分子式为C24H36O5，相对分子质量为329．1。易溶于甲醇、乙醇、氯仿，不溶于石油醚。

(2)样品预处理时过中性氧化铝柱以除去色素和杂质。中性氧化铝柱可购买商品预处理柱，也可用5ml注射器装柱，每次用时必须用甲醇20～30ml活化。

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