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淫羊藿苷的高效液相色谱测定法

2013-08-16    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于以淫羊藿或淫羊藿提取物为主要原料的保健食品中淫羊藿苷(icariin)的测定。
本方法淫羊藿苷检出限为0.85ng。

1.方法

提要样品直接用甲醇浸泡、超声提取后,在高效液相色谱仪中用反相柱分离,270nm紫外吸收,用外标法定量。

2.仪器

(1)高效液相色谱仪、紫外检测器。
(2)超声波提取器。

3.试剂

(1)甲醇:分析纯、色谱纯。
(2)冰醋酸:分析纯。
(3)超纯水:双蒸水经Milli—Q型纯水器过滤。
(4)淫羊藿苷对照品:中国药品生物制品检定所。准确称取淫羊藿苷对照品10mg,用甲醇溶解并定容至25ml,为标准淫羊藿苷贮备液,临用前再用甲醇稀释为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml的标准使用液。

4.测定步骤

(1)样品制备:准确称取样品适量置于50ml容量瓶中(液体试样可减压浓缩至近干),加甲醇约45ml,浸泡放置过夜,超声提取30min后冷却,加甲醇至刻度,混匀,静置,取上清液过0.45μm滤膜后,在高效液相色谱仪中进样测定。
(2)标准曲线绘制:上述各标准使用液分别注入高效液相色谱仪中,记录峰面积,以相应的对照品浓度值作图。
(3)色谱条件色谱柱:Kromasil C18,250mm×4.6mm,5μm。
流动相:甲醇+水+冰醋酸(60+40+0.5,V/V/V)。
波长:270nm。
流速:0.8ml/min。
进样量:10μl。

5.结果计算

X=(c×V×100)/(m×1000)
式中x——样品中淫羊藿苷含量[mg/lOOg(m1)];
c——从标准曲线查得样液中淫羊藿苷的质量(μg);
V——样液定容体积(m1);m——样品质量(g或ml);
1000——μg换算成mg的换算系数。

6.注释

(1)本方法线性范围为5~40μg/ml,r=0.9980。
(2)本方法平均回收率为98.6%(n=3),RSD为1·6%。
(3)精密度:RSD为1.3%(n=5)。
(4)附:某活力胶囊淫羊藿苷的标准及样品色谱图(图3—32、3—33)。

淫羊藿苷色谱图

淫羊藿苷色谱图

参考文献

[1]陈发奎主编.常用中草药有效成分含量测定.北京:人民卫生出版社·1997
[2]周华蓉,等.宝兴淫羊藿不同物候期淫羊藿苷及总黄酮含量的动态变化

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