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绞股蓝皂苷的分光光度测定法

2013-11-09    分类:检测方法    0人评论

本方法适用保健食品中绞股蓝总皂苷的测定。

本方法绞股蓝总皂苷的检出限为8μg。

1.方法提要

样品中的绞股蓝皂苷,经甲醇提取,大孔树脂及氧化铝柱分离净化后,在酸性条件下,与香草醛反应呈现紫红色化合物,与标准品比较定量。

2.仪器

(1)分光光度计。(2)恒温水浴箱。(3)微量注射器。(4)层析柱:10ml注射器,带活塞的层析柱(1.5cm×15cm)。

3.试剂

(1)甲醇:分析纯。(2)乙醚:分析纯。(3)乙醇:分析纯。(4)5%香草醛冰醋酸溶液:冷藏。(5)高氯酸:分析纯。(6)5%香草醛冰醋酸溶液+高氯酸混合液(2+8,V/V):临用前配制。(7)绞股蓝皂苷对照品:含量98%。(8)101大孔吸附树脂。(9)中性氧化铝:柱层析用,100~200目。(10)绞股蓝皂苷对照品溶液:准确称取绞股蓝皂苷对照品100mg,用甲醇溶解并定容至50ml,即每1ml含绞股蓝皂苷2.0mg。

4.测定步骤

(1)样品处理

1)绞股蓝皂苷提取原粉:准确称取0.02g样品,加甲醇溶解定容至10ml供检。

2)绞股蓝提取浓汁:准确取样0.5g,置于水浴箱上蒸于,用甲醇溶解定容至10ml供检。

3)绞股蓝饮料:准确吸取样液20ml,置于小烧杯中,放置水浴箱上低温加热15min,赶去CO2后,倾入101大孔吸附树脂柱中(带活塞的1.5cm×15cm柱内装101大孔吸附树脂约5g),加热水40~50ml以1ml/min的流速过柱,用70%乙醇60ml以0.5mlfmin流速淋洗色层柱,弃去开头2ml流出液,然后收集洗脱液,置60℃水浴箱上挥干,用甲醇溶解残渣定容至2ml供检。

4)绞股蓝速溶茶:准确称取样品1.00g,加10ml水溶解后,按照4.(1)

3)项绞股蓝饮料处理方法倾人101大孔吸附树脂柱中进行操作即得。

5)绞股蓝胶丸、软胶囊:准确称取胶丸内容物1.00g,置于50ml三角瓶中,加海砂0.5~1g,加甲醇10ml提取3~4次至溶剂无色为止,合并甲醇提取液,置60℃ 2水浴中挥干溶剂,加水溶解残渣,转入分液漏斗中,加乙醚10ml提取3次,弃乙醚,取水溶液过101大孔吸附树脂柱(装大孑L吸附树脂于10ml注射器中约4cm高,上加1cm中性氧化铝),用水30ml洗柱,弃水液,用50%甲醇洗脱,收集洗脱液60ral,置60℃水浴箱上挥干,加甲醇溶解残渣并定容至2ml供检。

6)保健食品胶囊内容物或茶叶:准确称取研细的样品0.50g,置于三角瓶中,加甲醇30ml置60℃浴中回流4h,过滤。残渣用少量甲醇洗2~3次,提取液回收甲醇,残渣加水20ml溶解,转入分液漏斗中,加乙醚20ml萃取2次,合并乙醚,加少量水提取一次,弃乙醚液。水液并入原样液中,水液定容至25ml。吸取2.5ml样品处理液过101大孔吸附树脂柱,按4.(1) 5)项操作方法进行,收集50%甲醇洗脱液60~80ml,于60℃水浴箱上挥干,加甲醇溶解残渣,并定容至2ml供检。

(2)绞股蓝皂苷标准曲线的绘制:分别取标准溶液5μl、10μl、20μl、40μl、60μl、80μl、100μl(相当于标准品10μg、20μg、40μg、80μg、120μg、160μg、200μg),置于10ml具塞比色管中,于60℃水浴箱中挥于溶剂,各加入1ml 5%香草醛冰醋酸+高氯酸混合液(2+8),摇匀,密塞,置60℃ 2水浴箱中加热15min,取出,流水冷却至室温。各加冰醋酸5ml混匀,在555nm处测定吸光度,绘制标准曲线。绞股蓝总皂苷浓度在10~200μg/ml之间与吸光度值呈直线关系。回归方程Y=0.0153+0.001654x,r=0.997

(3)样品测定:取样品处理液40~60μl,置于10ml具塞比色管中,同上述标准曲线绘制方法操作,测定吸光度。查标准曲线,计算含量。

5.结果计算

X=m1/[m×(V2/V1)×1000×1000]

式中X——样品中皂苷含量[g/100g(ml)];

m1——样品管相当于皂苷的含量(μg);

m——样品的质量(g或ml);

V1——样品稀释的总体积(ml);

V2——测定时取样液的体积(ml)。

6.准确度和精密度

回收率为88.6%~100.2%,标准偏差为2.66%。

7.注释

(1)绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物的全草,含绞股蓝皂苷,具有降血脂、缓解体力疲劳、增强机体免疫力等功效。

(2)新购进的大孑L吸附树脂应经丙酮、乙醇浸泡处理,大量蒸馏水冲洗,湿法装柱,最后用pH值为10的氢氧化钠溶液过柱,用水洗至中性,柱子即可使用。

(3)样品溶液过柱前,应先做空白试验,即柱子洗脱溶剂置蒸馏器皿中将溶剂挥干,加显色剂1ml,以试剂零管测定吸光度,如吸光度值偏高,应查找原因,再进行处理。样品测定时,应以层析柱洗脱液作为空白调零,测定样品的吸光度值。

(4)层析柱可重复使用,久用的柱子吸附能力减弱,可用pH值为10的氢氧化钠进行再生。

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