硫酸软骨素的高效液相色谱测定法

本方法适用于保健食品中硫酸软骨素的测定。

本方法硫酸软骨素的检出限为100ng。

1．方法提要

样品中的硫酸软骨素用乙腈分散均匀，以水溶解，经反相离子对液相色谱分离后，在波长195nm测定，用外标法定量。

2．仪器

(1)高效液相色谱仪：配有紫外检测器。(2)超声波清洗器。

3．试剂

除非另有说明，所有试剂均为分析纯。(1)水：GB／T6682规定的一级水。(2)乙腈：色谱纯。(3)戊烷磺酸钠溶液：称取0．879戊烷磺酸钠，用500ml水溶解，该溶液的浓度为10mmol／L。(4)硫酸软骨素标准品：美国Sigma公司，纯度99％。(5)硫酸软骨素标准溶液：准确称取硫酸软骨素标准品10mg，置于10ml容量瓶中，先加入1ml乙腈，使其分散均匀，再加入超纯水至刻度线，用超声波超声使其充分溶解，即得到1．00mg／ml的标准贮备液。分别精密吸取对照品溶液0．1ml、0．2ml、0．5ml、1．0ml、2．0ml置10ml容量瓶中，用10％乙腈水溶液稀释至刻度，得到浓度为10μg／ml、20μg／ml、50μg／ml、100μg／ml、200μg／ml的标准系列溶液。

4．分析步骤

(1)样品处理：称取适量样品(相当于硫酸软骨素0．5mg)，精密至0．001g，置于10ml容量瓶中，加1．0ml乙腈，使其分散均匀，再用超纯水定容至10ml，超声20min，静置，经0．45μm滤膜过滤后作为供试品液。

(2)色谱条件

色谱柱：c18柱，150mm×4．6mm，5μm。

流动相：乙腈+戊烷磺酸钠溶液(10+90，V／V)。

流速：0．8ml／min。

检测波长：195nm。

进样量：10μl。柱温：室温。

(4)色谱测定：分别将10μl不同质量浓度的硫酸软骨素系列标准溶液及制备后的样品溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以硫酸软骨素质量浓度与相对应的峰面积绘制工作曲线，获得线性回归方程及相关系数，以此计算样品进样溶液中硫酸软骨素的浓度。

(5)色谱图：标准溶液及试样溶液的色谱图见图3—22，硫酸软骨素的保留时间约为2．15min。试样溶液色谱图中，硫酸软骨素色谱峰右侧为氨基葡萄糖(为保健食品中另一种功效组分)的色谱峰，其保留时间为2．46min，不影响硫酸软骨素的定量。

标准溶液及试样溶液的色谱图

5．结果计算

试样中硫酸软骨素的含量按下式进行计算。

X=(c×V)/(m×1000)

式中X——试样中硫酸软骨素含量(mg／g)；

c——由标准曲线计算得到的样品待测液中硫酸软骨素的浓度(μg／ml)；

V——样品提取时的稀释体积(ml)；

m——样品的质量(g)；

1000——由μg／g换算为mg／g的换算系数。

6．注释

硫酸软骨素(chondroitin sulfate)是以D一葡萄糖醛酸和2一乙酰氨基一2一脱氧一硫酸一D一半乳糖通过β一1，3糖苷键相结合的双糖为基本单位，聚合而成的一类大分子多糖，由动物软骨组织中提取而来。硫酸软骨素在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要的作用。

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