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黄芪甲苷的高效液相色谱测定法

2013-11-10    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于以黄芪或黄芪提取物为主要原料的保健食品中黄芪甲苷(astragaloside IV)的测定。

本方法黄芪甲苷的检出限为2ng。

1.方法提要

目前,《中国药典》中黄芪甲苷的质量标准是以黄芪甲苷作为对照品,采用薄层色谱扫描法进行含量测定,该方法在含有其他皂苷类成分的中药共存时,常因薄层色谱灵敏度不足而使分离度下降,而难以应用。本法对复方制品中的黄芪甲苷采用固相萃取预处理,用高效液相色谱紫外检测,外标法定量。

2.仪器

(1)高效液相色谱仪、紫外检测器。

(2)水浴锅。

(3)带冷凝管的提取回流装置(150ml)。

(4)C18预处理小柱。

3.试剂

(1)黄芪甲苷对照品(含量测定用):中国药品生物制品检定所。准确称取黄芪甲苷对照品8.0mg,用甲醇溶解并定容于20ml量瓶中,再用甲醇稀释成80μg/ml、160μg/ml、240μg/ml、320μg/ml、400μg/ml溶液。

(2)甲醇:分析纯、色谱纯。

(3)乙腈:色谱纯。

(4)乙醚:分析纯。

(5)正丁醇:分析纯。

(6)氨水:分析纯。按《中国药典》配制氨试液:浓氨水400ml加水至1000ml。

(7)水:双蒸水。

4.测定步骤

(1)样品处理

1) 固体试样:取20粒以上的片剂或胶囊试样研磨混匀,称取一定量(准确至0.001g,约5g)置冷凝回流装置中,用甲醇50ml×3h、30ml×2h、20ml×1h提取3次,合并甲醇液并回收甲醇至干,残渣加水20ml微热使溶解,先用乙醚洗涤2次,每次20ml,弃醚液,再用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次25ml,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次40ml,弃氨液,将正丁醇液回收溶剂至干,残渣加水5ml使溶解,通过预处理好的C18小柱(先用5ml甲醇、5ml水预洗),以水3ml洗脱,弃去水液,再用80%甲醇10ml洗脱,收集洗脱液蒸干,用甲醇溶解,并转移至2~5m1量瓶中(根据含量而定),用甲醇稀释至刻度,摇匀,此为供试品溶液。

2) 液体试样:取液体试样30~100ml(根据含量而定)减压浓缩至近干,加水20ml使溶解,置于分液漏斗中,用等量的乙醚溶液提取2次,弃醚液,再用水饱和的正丁醇每次20ml振摇提取4次,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,每次20ml,弃氨液,再按上法处理。

(2)色谱条件

色谱柱:Kromasil C18,5μm,250mm×4.6mm。

流动相:乙腈+水(1+2,V/V)。

检测波长:200nm。

流速:1.0ml/min。

进样量:10~20μl。

(3) 标准及样品测定:分别取样品液和各标准液10μl,注入高效液相色谱仪中,记录相应的峰面积,以标准液的浓度和峰面积值作图,并由样品液的峰面积计算出样品中被测物的含量。

5.结果计算

X=(c×V)/(m×1000)×100

式中X——样品中黄芪甲苷的含量[mg/100g(ml)];

c——从标准曲线查得样液中黄芪甲苷的质量(μg);

V——样品定容体积(ml);

m——样品质量(g或ml);

1000——μg换算成mg的换算系数。

6.注释

(1)本方法线性范围为80~400μg/ml,r=0.9997。

(2)本方法平均回收率为98.3%(n=3)。

(3)精密度:RSD=2.5%(12.=5)。

(4)附:某口服液黄芪甲苷标准及样品色谱图(图3—23、3—24)。

黄芪甲苷标准品色谱图

黄芪甲苷标准品色谱图

某口服液黄芪甲苷色谱图

某口服液黄芪甲苷色谱图

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