植提网-植物提取物行业百科全书(始于2011年)『声明:本站不参与任何植物提取物产品销售事宜,目前网上出现以植提网进行宣传的网站皆与本站无关,植提网官网请认准www.pewiki.net,以防上当受骗』

总黄酮的分光光度测定法

2013-10-03    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于各类食品中总黄酮的测定。
本方法总黄酮检出限为3.5μg/ml。

1.方法

提要黄酮类化合物(flavonoids)是具有苯骈吡喃环结构的一类天然化合物的总称,一般都具有4位羰基,且呈现黄色。黄酮类化合物多分布于植物中,大多数以苷的形式存在。黄酮类化合物中的3一羟基、4一羟基或5一羟基、4一羰基或邻二位酚羟基与铝盐进行络合反应,在碱性条件下生成红色的络合物。

本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后,用分光光度法于510nm波长下测定其吸光度,与芦丁标准品比较,进行待测物中总黄酮的定量测定。

2.仪器

(1)分光光度计。
(2)恒温水浴锅。
(3)真空泵。
(4)盐基交换管。

3.试剂

(1)亚硝酸钠:分析纯。
(2)硝酸铝:分析纯。
(3)氯仿:分析纯。
(4)无水乙醇:分析纯。
(5)氢氧化钠:分析纯。
(6)甲醇:分析纯。
(7)聚酰胺树脂:60~80目,Serva公司。
(8)芦丁标准品:美国Sigma公司。
(9)芦丁标准溶液:准确称取经105℃干燥至恒重的芦丁标准品15.Omg,加甲醇溶解并定容至lOOml,配成150μg/ml的芦丁标准溶液。
(10)水为去离子水。

4.测定步骤

(1) 样品处理

1) 固体样品:称取1~29干燥的固体样品,用滤纸包紧,置于平底烧瓶中加入50~100ml 70%乙醇溶液,浸润后,在80%水浴下回流2h,至黄酮类化合物基本提取完全。粗提液冷却后,减压抽滤,并用少量70%乙醇溶液洗涤滤渣,合并滤液。在50%下减压蒸馏,除去其中的乙醇,直至烧瓶内溶液呈无醇味。倒出烧瓶内溶液,并用30ml热水分3次洗涤烧瓶,抽滤后,将滤液倒入分液漏斗中,以75ml氯仿分3次萃取脱脂,待完全分层后,收集下层水溶液并定容至50ml。称取1~2g经预处理的聚酰胺树脂粉末,湿法装柱,用水饱和。吸取上述脱脂后的水溶液1~2ml,沿层析柱慢慢滴入柱内,放置一定时间,待测液被充分吸附后,用70%乙醇或甲醇洗脱,流速为1.Oml/min,至流出液基本无色,一般收集lOml即可。上述洗出液用洗脱剂(70%乙醇或甲醇)定容后即可用于测定。

2) 液体样品:准确吸取样品3.Oml,定容至50ml后,直接以75ml氯仿分3次萃取脱脂,其余步骤同上。

(2) 标准曲线的绘制:准确吸取芦丁标准溶液0ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml(相当于芦丁0μg、75μg、150μg、300μg、450μg、600μg),分别移人10ml刻度比色管中,加入30%乙醇液至5ml,各加5%亚硝酸钠溶液0.3m1,振摇后放置5min,加入10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀后放置60min,加1.Omol/L氢氧化钠溶液2ml,用30%乙醇定容至刻度,以零管为空白,摇匀后用1cm的比色皿,在510nm处测定吸光度,绘制芦丁含量(斗g)与吸光度的标准曲线。

(3) 样品测定:根据样品中总黄酮含量高低,取适宜体积待测液,按标准曲线制备操作步骤于5lOnm处进行吸光度的测定(样液如有沉淀,应过滤后测定)。芦丁浓度在0.0075~0.060mg/ml范围内呈直线关系,以最小二乘法计算,其回归方程为Y=0.090795x一0.00222。r=0.9998。

5.结果

计算根据标准曲线,求出相当于试样吸光度的芦丁含量,按下式求出总黄酮含量:

X=(m1×V2)/(m×V1×10^6)×100

x——样品总黄酮含量[g/100g(m1)];
m1——依据标准曲线计算出被测液中黄酮含量(μg);
m——试样的质量或体积(g或ml);
V1——待测液分取的体积(m1);
V2——待测液的总体积(m1)。
注:结果精确至小数点后两位。

6.注释

(1)方法精密度:对同一样品在相同条件下,重复测定6次,其相对标准差为4.4%。

(2)方法回收率:对总黄酮含量为1.52%的减肥茶加入相似浓度的芦丁标准品进行回收试验,其平均添加回收率为103.2%。

(3)对于以葡萄、山楂等有色水果为原料的样品,可用未加铝盐试剂的样液为空白或采用标准加入法进行测定,以避免样液颜色对测定干扰而引起结果偏高。

参考文献

曹根生,薛爱珍,李平,等.脉安冲剂中总黄酮含量测定方法的初步研究.中成药研究;(12):13~15

版权申明:转载请注明 植提网 » 总黄酮的分光光度测定法

免责声明:以上信息没有经过国家食品药品监督管理局评估和确认,来自公开发表的文献,由植提网整理发布,仅供参考。

如果您想对该产品信息进行补充请在文章后留言或者联系我们网站客服,将有机会获得免费企业或个人推广资格
植提网有您找的植物提取物信息
继续查看有关 的文章

看过本文的还看过

我来说说

*

*

取消