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绿原酸的高效液相色谱测定法

2013-10-13    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于以金银花及菊科植物或其提取物为主要原料的保健食品中绿原酸(chlorogenic acid)的测定。
本方法检出限为1.1ng。

1.方法

提要样品中的绿原酸用甲醇超声波提取后,在高效液相色谱仪中用反相柱分离,330nm紫外吸收,以外标法定量。

2.仪器

(1)高效液相色谱仪、紫外检测器。
(2)超声波提取器。

3.试剂

(1)甲醇:分析纯、色谱纯。
(2)甲酸:分析纯。
(3)超纯水:双蒸水经Milli—Q型纯水器过滤。
(4)绿原酸对照品:中国药品生物制品检定所。
(5)绿原酸标准使用液:准确称取绿原酸对照品7.5mg,置于25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,制成0.3mg/ml的标准溶液,再用甲醇稀释成浓度分别为0.03mg/ml、0.06mg/ml、0.09mg/ml、0.12mg/ml、0.15mg/ml的标准使用液。

4.测定步骤

(1)样品制备:准确称取混合均匀的样品内容物适量(视含量而定,糖浆状样可直接称取,液状样品可减压浓缩),置于50ml锥形瓶中,加甲醇50ral浸泡过夜,次日以超声波提取30min,过滤于另一个50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤后,于高效液相色谱仪中进样测定。
(2)标准曲线绘制:将上述各标准使用液分别注人高效液相色谱仪中,记录峰面积,以相应的浓度值绘制标准曲线。
(3)色谱条件
色谱柱:Kromasil C18 250mm×4.6mm,5μm。
流动相:甲醇+水+甲酸(16+83+1,V/V/V)。
波长:330nm。
进样量:10~20μl。
流速:1.Oml/min。

5.结果计算

X=(c×V×100)/m

式中x——样品中绿原酸含量[mg/100g(ml)];
c——从标准曲线查得样液中绿原酸的质量(mg);
V——样品定容体积(ml);m——样品质量(g或ml)。

6.注释

(1)本方法线性范围为0.03~0.15mg/ml,r=0.9996。
(2)本方法平均回收率为98.O%,RSD=1.5%(n=3)。
(3)精密度RSD=1.1%(n=5)。
(4)绿原酸见光易分解,操作过程应注意避光。
(5)附:某川贝橘红膏绿原酸的标准(图3—85)。

绿原酸标准色谱图

绿原酸标准色谱图

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