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芦荟苷的高效液相色谱测定法

2013-10-19    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于芦荟制品中芦荟苷的测定。

本方法芦荟苷的检出限为10ng。

1.方法

提要芦荟苷是芦荟中主要生物活性成分之一,是羟基蒽醌类衍生物,系由羟基蒽醌meso位的氢与糖结合而成。用甲醇+水(55+45)作为溶剂,提取芦荟制品中的芦荟苷,用高效液相色谱仪、紫外检测器在293nm条件下检测,以芦荟苷保留时间定性,以峰面积定量。

2.仪器

(1)LC4A高效液相色谱仪(Shimazdu,日本),CRIB色谱处。U理机。

(2)SPD一2AS紫外检测器。

(3)离心机。

(4)超声波振荡器。

(5)Cls净化富集柱。

3.试剂

(1)甲醇:色谱纯。

(2)水:重蒸水。

(3)芦荟苷标准品:中国药品生物制品检定所。

(4)芦荟苷标准溶液:准确称取10mg芦荟苷标准品,置于100ml容量瓶中,用甲醇+水(55+45)流动相溶解并定容至刻度,所得溶液每1ml含芦荟苷0.1mg。

4.测定步骤

(1)样品处理:将固体试样粉碎成粉末状,准确称取试样1.00g,置于50ml容量瓶中,加水30ml溶解,经超声波振提5min,加水补足至刻度,提取液略澄清后经离心分离(3000r/min,5min),取上清液10ml通过C18净化富集柱,用20ml水将该柱洗净后,用甲醇+水(55+45)10ml洗脱,洗脱液经微孔滤膜(0.45μm)过滤备用。液体试样经C18净化富集柱预处理后备用。

(2)色谱条件

色谱柱:Shim—PackCLC—ODS,150mm×6mm,5μm。

流动相:甲醇+水(55+45)混匀。

流速:1ml/min。

柱温:40℃。

检测波长:293nm。

灵敏度:0.016AUFS。

进样量:10μl。

(3)样品测定:准确吸取样品处理液和标准液各10μl注入高效液相色谱仪进行分离,以其标准溶液峰的保留时间定性,以其峰面积求出样液中被测物质的含量。标准品色谱图见图3—100,样品色谱图见图3—101。

芦荟苷色谱图

芦荟苷色谱图

5.结果计算·

X=(S1×c×V×100)/(S2×m)

式中X——样品中芦荟苷的含量[mg/100g(ml)];

S1——样品峰面积;

c——标准溶液浓度(mg/ml);

S2——标准溶液峰面积;

V——样品定容体积(ml);

m——试样质量(g或ml)。

6.注释

(1)本方法在芦荟苷浓度为0.01~0.1mg/ml范围内呈直线关系,其回归方程为Y=1.11x+1.24,r=0.9992。

(2)精密度:同一样品在上述操作条件下重复测定6次,其相对标准差(RSD)为0.5%。(3)样品中标准添加回收率为89.3%~104.3%。

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