芦荟苷的高效液相色谱测定法

本方法适用于芦荟制品中芦荟苷的测定。

本方法芦荟苷的检出限为10ng。

1．方法

提要芦荟苷是芦荟中主要生物活性成分之一，是羟基蒽醌类衍生物，系由羟基蒽醌meso位的氢与糖结合而成。用甲醇+水(55+45)作为溶剂，提取芦荟制品中的芦荟苷，用高效液相色谱仪、紫外检测器在293nm条件下检测，以芦荟苷保留时间定性，以峰面积定量。

2．仪器

(1)LC4A高效液相色谱仪(Shimazdu，日本)，CRIB色谱处。U理机。

(2)SPD一2AS紫外检测器。

(3)离心机。

(4)超声波振荡器。

(5)Cls净化富集柱。

3．试剂

(1)甲醇：色谱纯。

(2)水：重蒸水。

(3)芦荟苷标准品：中国药品生物制品检定所。

(4)芦荟苷标准溶液：准确称取10mg芦荟苷标准品，置于100ml容量瓶中，用甲醇+水(55+45)流动相溶解并定容至刻度，所得溶液每1ml含芦荟苷0．1mg。

4．测定步骤

(1)样品处理：将固体试样粉碎成粉末状，准确称取试样1．00g，置于50ml容量瓶中，加水30ml溶解，经超声波振提5min，加水补足至刻度，提取液略澄清后经离心分离(3000r／min，5min)，取上清液10ml通过C18净化富集柱，用20ml水将该柱洗净后，用甲醇+水(55+45)10ml洗脱，洗脱液经微孔滤膜(0．45μm)过滤备用。液体试样经C18净化富集柱预处理后备用。

(2)色谱条件

色谱柱：Shim—PackCLC—ODS，150mm×6mm，5μm。

流动相：甲醇+水(55+45)混匀。

流速：1ml／min。

柱温：40℃。

检测波长：293nm。

灵敏度：0．016AUFS。

进样量：10μl。

(3)样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10μl注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量。标准品色谱图见图3—100，样品色谱图见图3—101。

芦荟苷色谱图

5．结果计算·

X=(S1×c×V×100)/(S2×m)

式中X——样品中芦荟苷的含量[mg／100g(ml)]；

S1——样品峰面积；

c——标准溶液浓度(mg／ml)；

S2——标准溶液峰面积；

V——样品定容体积(ml)；

m——试样质量(g或ml)。

6．注释

(1)本方法在芦荟苷浓度为0．01～0．1mg／ml范围内呈直线关系，其回归方程为Y=1．11x+1．24，r=0．9992。

(2)精密度：同一样品在上述操作条件下重复测定6次，其相对标准差(RSD)为0．5％。(3)样品中标准添加回收率为89．3％～104．3％。

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