1-脱氧野尻霉素的高效液相色谱测定法

2013-10-16 分类：检测方法 0人评论

本方法适用于保健食品中1一脱氧野尻霉素含量的测定。

本方法1一脱氧野尻霉素的检出限为0．1μg。

本方法线性范围为0．1～1．0mg／ml。

1．方法

提要试样中的1一脱氧野尻霉素经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定1一脱氧野尻霉素的含量。

2．仪器

高效液相色谱仪，带SEDEX75蒸发光散射检测器。

3．试剂

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB／T6682规定的一级水。

(1)乙腈：色谱纯。

(2)提取液：水+乙腈(70+30，V／V)。

(3)1一脱氧野尻霉素对照品：Sigma公司(纯度≥90％)。

(4)1一脱氧野尻霉素标准溶液(10．0mg／ml)：精确称取250mg 1一脱氧野尻霉素，用提取液定容至25ml，即得1一脱氧野尻霉素标准溶液。

4．测定步骤

(1)样品处理：取均匀样品0．50g(精确到0．1mg)，置于25ml容量瓶中，加入20ml提取液，混匀，超声波振荡30min，取出，冷却后用提取液定容，摇匀后经0．45μm微孔滤膜过滤，清液待分析。

(2)标准工作曲线绘制：精密吸取1一脱氧野尻霉素标准溶液1．0ml、5．0ml、10．0ml，分别置于100ml容量瓶中，用提取液定容，摇匀。分别取10μl标准工作系列溶液进样分析，以测得的1一脱氧野尻霉素的峰面积分别对1一脱氧野尻霉素的浓度绘制标准曲线。

(3)色谱条件

色谱柱：Cosmosil Sugar D氨基液相色谱柱，250mm×4．6mm，5μm。

流动相：水+乙腈(25+75，V／V)。

流速：1．0ml／min。

柱温：室温。

蒸发光散射检测：蒸发温度35℃，压力3．5Bar。

(4)样品测定：取样品滤液10p,1进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，以外标峰面积法进行定量。

(5)色谱图：1一脱氧野尻霉素标准色谱图见图3—95。

图3—95 1一脱氧野尻霉素标准色谱图

5．结果计算

根据待测样品色谱峰面积，由标准曲线回归方程式得样品液中1一脱氧野尻霉素含量，计算出样品中的含量。样品中1一脱氧野尻霉素含量按下式进行计算：

X=(c×V×100)/(m×1000)

式中x——样品中1一脱氧野尻霉素含量(g／100g)；

c——进样液中1一脱氧野尻霉素的浓度(mg／ml)；

V——样品的定容体积(ml)；

m——样品的取样量(g)。

6．注释

(1)桑叶在传统中药中被用于降血糖，其有效成分是含氮的糖。一些含氮的糖具有仪一葡萄糖苷酶的抑制活性，且与口服降血糖药的仪一葡萄糖苷酶的抑制活性相似。1一脱氧野尻霉素(DNJ)就是其中的一种含氮糖。DNJ的获得可通过三种途径：①从某些植物及以这些植物为食的蛾中提取；②从不同细菌的发酵液中分离提纯；③生物合成。1一脱氧野尻霉素的分子式为C6H13NO4，分子量为163。它为淡(棕)黄色粉末，易溶于水和醇。

(2)蒸发光散射检测器的响应值(Y)与被测物浓度(茁)的关系由于仪器品牌和结构的不同，大多可能是指数关系，即Y=αx⁶，但少数也可能是二次函数关系，即Y=αx+bx²，可以根据实际情况选择合适的关系曲线。

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