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1-脱氧野尻霉素的高效液相色谱测定法

2013-10-16    分类:检测方法    0人评论

本方法适用于保健食品中1一脱氧野尻霉素含量的测定。

本方法1一脱氧野尻霉素的检出限为0.1μg。

本方法线性范围为0.1~1.0mg/ml。

1.方法

提要试样中的1一脱氧野尻霉素经提取后在氨基色谱柱上分离,根据保留时间定性,用蒸发光散射检测器测定1一脱氧野尻霉素的含量。

2.仪器

高效液相色谱仪,带SEDEX75蒸发光散射检测器。

3.试剂

除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

(1)乙腈:色谱纯。

(2)提取液:水+乙腈(70+30,V/V)。

(3)1一脱氧野尻霉素对照品:Sigma公司(纯度≥90%)。

(4)1一脱氧野尻霉素标准溶液(10.0mg/ml):精确称取250mg 1一脱氧野尻霉素,用提取液定容至25ml,即得1一脱氧野尻霉素标准溶液。

4.测定步骤

(1)样品处理:取均匀样品0.50g(精确到0.1mg),置于25ml容量瓶中,加入20ml提取液,混匀,超声波振荡30min,取出,冷却后用提取液定容,摇匀后经0.45μm微孔滤膜过滤,清液待分析。

(2)标准工作曲线绘制:精密吸取1一脱氧野尻霉素标准溶液1.0ml、5.0ml、10.0ml,分别置于100ml容量瓶中,用提取液定容,摇匀。分别取10μl标准工作系列溶液进样分析,以测得的1一脱氧野尻霉素的峰面积分别对1一脱氧野尻霉素的浓度绘制标准曲线。

(3)色谱条件

色谱柱:Cosmosil Sugar D氨基液相色谱柱,250mm×4.6mm,5μm。

流动相:水+乙腈(25+75,V/V)。

流速:1.0ml/min。

柱温:室温。

蒸发光散射检测:蒸发温度35℃,压力3.5Bar。

(4)样品测定:取样品滤液10p,1进液相色谱分离测定,根据色谱峰保留时间定性,以外标峰面积法进行定量。

(5)色谱图:1一脱氧野尻霉素标准色谱图见图3—95。

图3—95 1一脱氧野尻霉素标准色谱图

图3—95 1一脱氧野尻霉素标准色谱图

5.结果计算

根据待测样品色谱峰面积,由标准曲线回归方程式得样品液中1一脱氧野尻霉素含量,计算出样品中的含量。样品中1一脱氧野尻霉素含量按下式进行计算:

X=(c×V×100)/(m×1000)

式中x——样品中1一脱氧野尻霉素含量(g/100g);

c——进样液中1一脱氧野尻霉素的浓度(mg/ml);

V——样品的定容体积(ml);

m——样品的取样量(g)。

6.注释

(1)桑叶在传统中药中被用于降血糖,其有效成分是含氮的糖。一些含氮的糖具有仪一葡萄糖苷酶的抑制活性,且与口服降血糖药的仪一葡萄糖苷酶的抑制活性相似。1一脱氧野尻霉素(DNJ)就是其中的一种含氮糖。DNJ的获得可通过三种途径:①从某些植物及以这些植物为食的蛾中提取;②从不同细菌的发酵液中分离提纯;③生物合成。1一脱氧野尻霉素的分子式为C6H13NO4,分子量为163。它为淡(棕)黄色粉末,易溶于水和醇。

(2)蒸发光散射检测器的响应值(Y)与被测物浓度(茁)的关系由于仪器品牌和结构的不同,大多可能是指数关系,即Y=αx6,但少数也可能是二次函数关系,即Y=αx+bx2,可以根据实际情况选择合适的关系曲线。

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