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β一胡萝卜素的分光光度测定法

2013-11-03    分类:检测方法    0人评论

本方法只适用于保健食品营养补充剂中β一胡萝卜素(β—carotene)的测定。

本方法β一胡萝卜素的检出限为0.2μg。

1.方法提要

目前,胡萝卜素的测定方法主要为GB/T5009.83—2003“食品中胡萝卜素的测定”方法(含高效液相色谱法和纸层析法),这两种方法都是针对食品中与蛋白质结合的胡萝卜素而言,要用混合溶剂提取(甚至皂化)、柱层析纯化、分离测定等繁琐的操作规程步骤;对于只强化天然G一胡萝卜素的营养补充剂中岱一胡萝卜素的检测,可根据产品中β一胡萝卜素与标准对照品的正己烷溶液在分光光度计450nm处测吸光度值,比色定量。

2.仪器

(1)可见分光光度计。

(2)高速离心机:10000r/min。

(3)旋涡混合器。

3.试剂

氯仿(AR)、正己烷(AR)、p一胡萝卜素标准品[Fluka公司,纯度>97.0%(UV)]。

4.测定步骤

(1)样品测定:准确称取适量的均匀样品(准确至0.001g),用氯仿溶解并定容至25~50ml,取0.10ml(或适量)加入到5.0ml的正己烷溶液中,混匀,在分光光度计450nm处测吸光度值(应在0.3~0.4之间)。这类保健食品多为用植物油稀释的软胶囊,如为片剂和粉剂,用氯仿溶解后,静置片刻,取上清液,10000r/min离心3min,再取样测定。

(2)标准溶液的标定及配制

1)称取5.0mg β一胡萝卜素标准品溶解在25ml氯仿中。

2)吸取0.050ml上述标准溶液加入到5.0ml的正己烷溶液中,在分光光度计450nm处,以正己烷作空白调零测定其吸光度值,连续测定三次,取其平均值,按下式计算标准溶液的浓度:

X=(A×5.05)/(E×0.05)

式中X——β一胡萝卜素标准溶液的浓度(μg/ml);

A——吸光度值;

E——β一胡萝卜素在正己烷溶液中,入射波长450nm,比色皿厚度1cm,溶液浓度为1mg/L的吸光系数为0.2638;

用正己烷作溶剂,再将上液配成0μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml的标准系列溶液,在450nm处测定并记录相应的吸光度值,以浓度值为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。其回归方程为Y=0.2598x+0.0077,r=0.9999。

β一胡萝卜素标准曲线

β一胡萝卜素标准曲线

5. 结果计算

X=(C×V×F×100)/(m×1000)

式中X——样品B一胡萝卜素(mg/100g);

C——样品比色溶液相当于标准(μg/ml);

V——样品溶液定容体积(ml);

F——样品溶液比色时的稀释倍数(5.1/0.1);

m——样品质量(g);

1000——μg换算成mg的换算系数。

6.注释

(1)本法参考依据为QB1414—91中华人民共和国轻工行业标准“食品添加剂天然p一胡萝卜素”;本法只适用于添加单一种类胡萝卜素的营养补充剂,对该类型产品应同时进行其辅料的阴性确证试验。

(2)因B一胡萝卜素易氧化和不稳定,标准品标定后应在冰箱保存并在24小时内使用,否则应在实验前标定其即时浓度。

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